استاندارد کردن PCR تشخیصی به‏ وسیله اینترنال کنترل تکثیری

Authors

الهام مسلمی استادیار سلولی و مولکولی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران شرق، تهران، ایران

محمد امین محمودی کارشناس ارشد میکروبیولوژی، موسسه ایرانیان ژن فناور (IGF)، تهران، ایران

محمد حسن شاه حسینی دانشیار بیوتکنولوژیست، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهر قدس، تهران، ایران

مریم قهری کارشناس ارشد میکروبیولوژی، موسسه ایرانیان ژن فناور (IGF)، تهران، ایران

Abstract:

مقدمه: بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاه‏ها به علت استاندارد نبودن، از معایب روش‏‏‏‏های تکثیر مولکولی است. در بیشتر مقالات چاپ شده در زمینه تشخیص PCR عوامل عفونی، ‏اینترنال کنترل تکثیری (IC) وجود ندارد. هدف از پژوهش حاضر، طراحی و توسعه یک روش ساده و سریع، برای‏‏‏‏‏‏ ساخت اینترنال کنترل آزمون‏‏ PCR ‏در آزمایشگاه‏های ‏تشخیصی است. ‏ مواد و روش‏‏ ها: در پژوهش حاضر، برای ساخت اینترنال کنترل رقابتی، از پرایمرهای مرکب و روش PCR-Cloning استفاده شد‏‏. بدین ترتیب که پرایمرهای جلویی و عقبی تشخیص PCR ویروس هپاتیت) ‏(HBV، ویروس هرپس سیمپلکس ‏HSV))، مایکوباکتریوم توبرکلوزیس (MTB)،‏‏ مایکوپلاسما پنومونیه (Mpn)،‏‏ کریپتوکوکوس نئوفورمنس ‏(Cne)،‏‏ جنس سالمونلا (Sal. sp) و جنس مایکوپلاسما (M. sp) را در بخش '5 پرایمرهای ژن کینتوپلاست لیشمانیا، به شکل‏‏ دم طراحی و سنتز شد. اینترنال کنترل‏های تکثیری با پلاسمید pTZ57R الحاق و در باکتری اشریشیاکلی JM107 ترانسفورم شد‏‏. تعداد حداقل IC در هر واکنش PCR از طریق رقیق‏سازی ‏‏‏‏و همین‏طور طیف پاسخ PCR همراه با IC بررسی شد‏‏‏‏‏‏‏‏‏. ‏ نتایج: HBV–HSV–MTB–MPN–Cne–Sal. sp– و M. sp با پرایمر‏های اختصاصی به ترتیب برابر با 272bp-284bp-415bp-345bp-245bp-454bp-262bp و محصول اینترنال کنترل هم به ترتیب 672bp-668bp-661bp-669bp-660bp-662bp-660bp جفت باز بود، که از نظر اندازه، اختلاف مطلوبی بین محصول PCR و IC وجود دارد و به آسانی در ژل قابل تفکیک است. تعداد حداقل IC در هر واکنش، 1000 عدد تعیین شد. حداقل و حداکثر حساسیت آزمون‏‏ PCR همراه با IC برای همه عوامل در حد مطلوبی به دست آمد. در آزمون‏‏ ویژگی با عوامل مختلف هم، هیچ محصول ناخواسته‏ای ‏مشاهده نشد. ‏ بحث و نتیجه گیری: نتایج منفی و مثبت کاذب که به علت‏های‏‏‏ مختلف در روش‏‏‏ PCR رخ می‏دهد از مشکلات مهم این روش‏‏‏ جذاب است‏‏‏. استفاده از یک اینترنال کنترل در تشخیص مولکولی به عنوان کنترل داخلی، می‏‏تواند این خطاها را شناسایی کند.

Upgrade to premium to download articles

Already have an account?login

similar resources

استاندارد کردن pcr تشخیصی به‏ وسیله اینترنال کنترل تکثیری

مقدمه: بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاه‏ها به علت استاندارد نبودن، از معایب روش‏‏‏‏های تکثیر مولکولی است. در بیشتر مقالات چاپ شده در زمینه تشخیص pcr عوامل عفونی، ‏اینترنال کنترل تکثیری (ic) وجود ندارد. هدف از پژوهش حاضر، طراحی و توسعه یک روش ساده و سریع، برای‏‏‏‏‏‏ ساخت اینترنال کنترل آزمون‏‏ pcr ‏در آزمایشگاه‏های ‏تشخیصی است. ‏ مواد و روش‏‏ها: در پژوهش حاضر، برای ساخت اینترنال کنترل رقابتی، از پ...

full text

ساخت اینترنال کنترل تشخیص مولکولی ویروس هپاتیت B به روش PCR-Cloning

سابقه و هدف: در تشخیص هپاتیت ناشی از ویروس هپاتیت B (HBV )، بکارگیری تکنیک های آزمایشگاهی حساس و اختصاصی همچون PCR ضروری است. روشهای سرولوژیکی موجود، قابلیت تشخیص سریع و دقیق آلودگی را نداشته درحالیکه روشهای نوین مولکولی مانند PCR ابزار کارآمدی برای ارزیابی میزان شیوع HBV می باشد. بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاهها بدلیل استاندارد نبودن از معایب این تکنیک مولکولی قوی است. یکی از مهم ترین موانع در...

full text

ازدیاد وتکثیر ژن invA سالمونلا به وسیله PCR بعنوان یک روش تشخیصی این باکتریها

هدف: تعیین ژن تهاجم سالمونلاها با روش PCR طرح: مطالعه آزمایشگاهی روش: تعداد 60 نمونه سالمونلای جداشده از منابع مختلف انسانی و دامی ابتدا با آزمایشات بیوشیمیایی‘ مورد تایید قرار گرفتند . و سپس گروه سرمی این نمونه ها به وسیله آنتی سرم های پلی والان ومونو والان تشخیص معین گردید. برای استخراج DNA آنها از روش جوشاندن استفاده گردید. از دو پرایمر اختصاصی S139 و S141 مطابق برنامه خاصی برای تکثیر ژن...

full text

ساخت اینترنال کنترل تشخیص مولکولی ویروس هپاتیت b به روش pcr-cloning

سابقه و هدف: در تشخیص هپاتیت ناشی از ویروس هپاتیت b (hbv )، بکارگیری تکنیک های آزمایشگاهی حساس و اختصاصی همچون pcr ضروری است. روشهای سرولوژیکی موجود، قابلیت تشخیص سریع و دقیق آلودگی را نداشته درحالیکه روشهای نوین مولکولی مانند pcr ابزار کارآمدی برای ارزیابی میزان شیوع hbv می باشد. بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاهها بدلیل استاندارد نبودن از معایب این تکنیک مولکولی قوی است. یکی از مهم ترین موانع در...

full text

ازدیاد وتکثیر ژن inva سالمونلا به وسیله pcr بعنوان یک روش تشخیصی این باکتریها

هدف: تعیین ژن تهاجم سالمونلاها با روش pcr طرح: مطالعه آزمایشگاهی روش: تعداد 60 نمونه سالمونلای جداشده از منابع مختلف انسانی و دامی ابتدا با آزمایشات بیوشیمیایی‘ مورد تایید قرار گرفتند . و سپس گروه سرمی این نمونه ها به وسیله آنتی سرم های پلی والان ومونو والان تشخیص معین گردید. برای استخراج dna آنها از روش جوشاندن استفاده گردید. از دو پرایمر اختصاصی s139 و s141 مطابق برنامه خاصی برای تکثیر ژن ...

full text

تهیه و استاندارد کردن مقیاس رضایت شغلی

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}

Journal title

زیست شناسی میکروارگانیسم ها

volume 4 issue 15

pages -

publication date 2018-04-04

unfollow

{@ msg @}

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

PCR اینترنال کنترل PCR-Cloning

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com